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壹、用途說明
簡介：
即時螢光定量PCR技術於1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由於該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，在後基因體時代的來臨，已廣泛利用Real-Time PCR技術來應用基因表現、病毒或病原菌偵測的實驗及SNP genotyping Assay。
特有的實驗設計流程：Assay Development Guidelines縮短尋找條件的時間並保障實驗的品質
採用Primer Express設計TaqMan Probe與Primer。 採用Optimized定量PCR 的試劑。 採用標準化的PCR條件與反應濃度。 可將PCR的效率提升至100%。
特點：
1. 反應模式 快速模式僅需40分鐘，也可採取標準模式2小時內完成反應，最多完成96個反應。
2. 獨家Veriflex加熱塊技術，六道獨立控溫，讓你同時進行六種不同PCR的反應條件。
3. 四色螢光偵測系統，輕鬆執行 Multiplex Real Time PCR 實驗。
4. 軟體整合所有實驗應用 包含。
a. 絕對定量 (Standard Curve)。
b. 相對定量 (△△ Ct Method & Relative standard Curve)。
c. Melting Curve Analysis。
d. SNP genotyping Assay。
e. Presence/Absence Assay (定性判讀)。
5. 操作最簡便: 軟體介面直覺式引導設定 不需翻閱操作手冊。
貳、使用規則一、使用本機需事先預約。(請參閱預約規定)
二、上機前應先於使用登記簿上填寫各項資料，並於上機完成後儘速將樣品取回，否則樣品若有損壞請自行負責。
三、使用者不得在中心的電腦上進行下列操作：
A. 改動程式或參數，或他人的檔案。
B. 自行外接任何週邊設備。
C. 拷貝程式至中心電腦中執行（中心電腦中之程式皆為原版，有版權）。違者永遠停止使用，若造成損害，論校規處罰。
四、若上機時有任何問題，請詢問儀器中心技術人員。
參、預約規定一、預約者須為真正使用人，不得頂替使用。
二、預約最早為二週前。﹝例如：今天星期二最早只能預約至下下星期一﹞
三、每人每次最多可預約兩個時段，且須間隔，每個時段最長不可超過 3小時。
四、在預約時段內1小時以上沒使用，視同放棄使用，他人得以隨時使用。
五、附屬配件取用或歸位時間，不得影響他人使用。
六、個人物品請帶走，勿留下sample或可能的碎玻璃。
請注意：
※ 取消預約須儘早取消，以免損及他人權益！若有經常預約不到又不先前取消者，經檢舉調查有習慣佔用之嫌者，本中心將嚴格限制其使用。
StepOnePlus快速上機流程（
點此觀看）
StepOnePlus實驗建立流程（ 點此觀看）
StepOnePlus簡易分析流程（ 點此觀看）
Primer Express v3.0中文操作手冊（ 點此觀看）
教育訓練講義（ 點此觀看）
教學影片
伍、相關連結「儀器技術應用訓練」之一（ 線上播放 1:02:03 ）
「儀器技術應用訓練」之二（
美商應用生命系統 台灣分公司 (Applied Biosystems Taiwan)
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壹、用途說明
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PCR 背景簡介：
自一九九三年以來，Kary Mullis 因聚合酶連鎖反應技術 (Polymerase Chain Reaction; PCR)，獲頒諾貝爾獎(Nobel Prize) 殊榮，PCR技術就被科學界公認：為近數十年來分子生物領域的最大成就。過去許多生物醫學上無法解決的難題，如今均已被徹底地迎刃而解。因此，PCR 技術被廣泛地應用於各方領域上，如：遺傳病檢測、傳染病源鑑定、腫瘤機制探查、家畜、家禽、水產、農作物改良、育種、法醫鑑定、考古探究、偵測刑事犯罪案件、親緣鑑定、基因篩選增殖(gene cloning)、核甘酸序列分析、基因表現調控研究，和基因多型性分析等種種偵檢及診斷之應用。
即時偵測定量的來由：
由於傳統的PCR技術只能對基因的偵檢，作定性的分析；也就是只針對特定基因的偵測，做出有或無存在的診斷，無法精確的定量出所表現的基因數量，使得醫學診斷中，有關量化的問題始終無法獲得解決。於是羅氏醫學儀器公司(Roche Diagnostics Ltd.)，將PCR的功能擴充升級，研發出即時偵測同步定量的聚合酶連鎖反應器(On line, real time PCR -- LightCycler)，將下列常見的診斷研究，做出史前未有的瓶頸突破：
1. 病毒負荷量的定量監督偵測。
2. 基因表現量(RNA or DNA)的定量偵測研究。
3. 單一核甘酸的多型性基因型 (Single Nucleotide Polymorphisim : SNP)的分析研究。
4. 基因改良食品(Genetic modified Organisms；GMOs)的外來修飾性基因片段的定量偵測。
5. 同異質基因型(homogeneous & heterogeneous genotype)的突變偵檢與分型研究。
LightCycler的功能與技術：
LightCycler的主要功能，有下列幾點 :
1. Monitor gene amplification online and in real-time --- 以即時同步的方式，偵查追蹤特定基因的表現。
2. 透過下列不同的方法偵測：
(1) SYBR Green I
(2) Sequence-specific hybridization probe3. 利用 melting curve 的原理，分析PCR產物的異質性。
LightCycler 的優點：
1.屬最正確的定量PCR產物，不需連續稀釋檢體。
2.操作流程最省時，三十分鐘內同步完成PCR反應的定量與分析。
3.污染風險最小。
4.具有melting curve的分析軟體，是Genotyping 的最佳篩檢利器。
結論：
隨著人類基因組譜的解碼完成，更突顯LightCycler (定量PCR)的技術發明，讓分子生物的診斷研究，如虎添翼般地提供更迅速、精確、簡便的方法，也讓人類對疾病的侵襲，具有防微杜漸的能力，更讓傳染性的病原菌，和致癌基因等危害因子無所遁形！
貳、使用規則一、使用本機需事先預約。(請參閱預約規定)
二、上機前應先於使用登記簿上填寫各項資料，並於上機完成後儘速將樣品取回，否則樣品若有損壞請自行負責。
三、使用者不得在中心的電腦上進行下列操作：
A. 改動程式或參數，或他人的檔案。
B. 自行外接任何週邊設備。
C. 拷貝程式至中心電腦中執行（中心電腦中之程式皆為原版，有版權）。違者永遠停止使用，若造成損害，論校規處罰。
四、若上機時有任何問題，請詢問儀器中心技術人員。
參、預約規定一、預約者須為真正使用人，不得替代預約。
二、預約最早為二週前。﹝例如：今天星期二最早只能預約至下下星期一﹞
三、每人每次最多可預約兩個時段，每個時段最長不可超過6小時。使用結束後，才可再預約下次使用時段。
四、在預約時段內1小時以上沒使用，視同放棄使用，他人得以隨時使用。
五、附屬配件取用或歸位時間，不得影響他人使用。
六、個人物品請帶走，勿留下sample或可能的碎玻璃。
請注意：
※ 取消預約須儘早取消，以免損及他人權益！若有經常預約不到又不先前取消者，經檢舉調查有習慣佔用之嫌者，本中心將嚴格限制其使用。
LightCycler 
羅氏醫學儀器公司 (Roche Diagnostics Ltd.)
